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小鼠肝細(xì)胞分離技巧:提高細(xì)胞純度和存活率

更新時(shí)間:2024-07-19點(diǎn)擊次數(shù):2515

  小鼠肝細(xì)胞分離是生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)基本技術(shù),對(duì)于肝臟疾病機(jī)制研究、藥物篩選和細(xì)胞治療等具有重要意義。然而,肝細(xì)胞分離過程中的純度和存活率是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素。本文將分享一些實(shí)用的分離技巧,旨在提高小鼠肝細(xì)胞的純度和存活率。

  

  一、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作

  1.選擇合適的實(shí)驗(yàn)小鼠:選用健康、適齡的小鼠,一般選擇8-12周齡的成年小鼠,以保障肝細(xì)胞的活力。

  2.實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備:確保所有實(shí)驗(yàn)器材無菌,包括手術(shù)器械、離心管、培養(yǎng)皿等。同時(shí),準(zhǔn)備好預(yù)冷的PBS緩沖液、酶消化液等試劑。

  3.環(huán)境控制:實(shí)驗(yàn)過程中,保持實(shí)驗(yàn)室溫度在22-25℃,以減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。

小鼠肝細(xì)胞分離技術(shù)

 

  

  二、小鼠肝細(xì)胞分離步驟及技巧

  1.麻醉與消毒:采用戊巴比妥鈉對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉,剃毛并消毒手術(shù)部位。

  2.開腹與肝臟取材:沿小鼠腹部中線切開,暴露肝臟,用無菌眼科剪剪下肝臟,放入預(yù)冷的PBS緩沖液中。

  3.肝細(xì)胞消化:將肝臟剪成小塊,加入含有酶消化液的培養(yǎng)皿中,置于37℃水浴鍋中振蕩消化。

  

  以下為提高純度和存活率的技巧:

  a.酶濃度優(yōu)化:根據(jù)肝臟的軟硬程度,調(diào)整酶消化液的濃度,避免消化過度或不足。

  b.消化時(shí)間控制:密切觀察肝臟組織的變化,一般在20-30分鐘內(nèi)完成消化,避免時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞損傷。

  c.輕柔操作:在消化過程中,輕柔搖動(dòng)培養(yǎng)皿,避免劇烈振蕩造成細(xì)胞損傷。

  

  4.細(xì)胞過濾與洗滌:消化結(jié)束后,用200目細(xì)胞篩過濾,去除未消化的組織塊。然后,用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌細(xì)胞,去除殘留的酶和雜質(zhì)。

  

  三、細(xì)胞純化與存活率檢測(cè)

  1.差速離心法:將過濾后的細(xì)胞懸液低速離心(500rpm)去除紅細(xì)胞,再進(jìn)行高速離心(1200rpm)獲得純凈的肝細(xì)胞。

  2.臺(tái)盼藍(lán)染色法:對(duì)分離得到的肝細(xì)胞進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色,計(jì)算活細(xì)胞比例,評(píng)估細(xì)胞存活率。

  

  四、提高細(xì)胞純度和存活率的關(guān)鍵點(diǎn)

  1.無菌操作:全程嚴(yán)格無菌操作,防止細(xì)菌、真菌污染。

  2.預(yù)冷處理:所有試劑和器材均需預(yù)冷,降低細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。

  3.短時(shí)間內(nèi)完成操作:從肝臟取材到細(xì)胞分離,盡量在短時(shí)間內(nèi)完成,減少細(xì)胞在體外環(huán)境中的損傷。

  

  小鼠肝細(xì)胞分離技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中具有重要價(jià)值。通過掌握上述技巧,我們可以在一定程度上提高肝細(xì)胞的純度和存活率,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。在實(shí)際操作過程中,還需不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn),優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案,以獲得更高質(zhì)量的肝細(xì)胞。

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