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小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的7個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟

更新時(shí)間:2020-07-20點(diǎn)擊次數(shù):2290
  小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織;卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同,僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化),呈葡萄狀,均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡,卵泡呈黃色,卵巢表面密布血管。
  細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。
  實(shí)驗(yàn)步驟:
  ① 入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;
 ?、?倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱;
 ?、?超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;
 ?、?打開超凈工作臺(tái)的紫外燈照射臺(tái)面20min左右,關(guān)閉紫外燈,打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧;
 ?、?點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管,安上橡皮頭,過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi);
 ?、?將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上;
  ⑦ 倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基,洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下。
  小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。
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